«История донского казачества XVI-нач. ХХ веков» - основная историческая экспозиция. Рассказывает об истории зарождения казачества и превращения его грозную силу на юге России.
На выставке можно познакомиться с героическим прошлым донских казаков, прикоснуться к уникальной казачьей культуре, быту и традициям; узнать о возникновении донских казаков, их быте, обычаях, культуре; о значимых событиях: восстаниях Разина, Булавина, Пугачева, войне 1812 года; разжалование г. Черкасска в станицу Старочеркасскую и переноса столицы в г. Новый Черкасск.
В залах представлены уникальные экспонаты из фондов музея: оружие, защитное снаряжение, предметы быта, одежда, макеты жилой и культовой архитектуры, документы, живопись, фотографии и многое другое.